Qual é a melhor centrífuga para PRP

A terapia com plasma rico em plaquetas está rapidamente ganhando atenção como um tratamento revolucionário e simples para uma variedade de doenças. Ao usar a concentração de plaquetas do próprio corpo na terapia com PRP, os médicos podem replicar os vários efeitos naturais do corpo para promover a cicatrização de feridas e promover o reparo e o crescimento celular. No entanto, o processo exato de obtenção do plasma desejado está longe de ser simples: a viabilidade plaquetária dependerá em grande parte do kit de PRP usado para preparar o concentrado de plaquetas, e a centrífuga de PRP é fundamental para esse processo.

Então, qual é a melhor centrífuga que a prática pode usar para a terapia com PRP? A preparação de plasma rico em plaquetas (PRP) a partir de sangue total requer centrifugação para separar e concentrar as plaquetas. A centrifugação utiliza o princípio da força centrífuga para acelerar o processo natural de sedimentação. Os profissionais que administram PRP contendo um grande número de plaquetas vivas no tecido danificado verão aumento da regeneração do tecido e melhores resultados.

Embora uma concentração plaquetária típica seja em torno de 200.000/µL. No entanto, a concentração de plaquetas no PRP deve exceder 1.000.000/µL ou 5 vezes o nível basal

Como um aumento de 5 vezes na concentração de plaquetas pode ser alcançado na prática? Que outras etapas são importantes para manter outras propriedades potencialmente importantes do PRP, como morfologia plaquetária, ativação plaquetária ou concentrações de fatores de crescimento?

A preparação do PRP inclui basicamente três etapas principais:

• Coleta de amostra – o plasma é produzido após a coleta do sangue do paciente;
• Centrifugação – concentrar plaquetas e outros componentes da cicatrização de feridas para obtenção do PRP;
• Armazenamento – Preservar a qualidade do PRP antes do uso clínico.

Em um método fechado para a preparação de PRP, todas essas etapas são realizadas de forma pré-definida em um sistema integrado totalmente fechado e estéril. Em contraste, os métodos abertos oferecem a oportunidade de otimizar cada etapa de forma independente. No entanto, deve-se tomar cuidado para manter a esterilidade em todos os momentos.

Aqui, nos concentramos em métodos abertos e resumimos as evidências mais recentes sobre protocolos ideais para coleta, centrifugação e armazenamento de PRP.

Coleta de amostra de PRP

O PRP é derivado do plasma, portanto, o primeiro passo para fazer o PRP é gerar plasma a partir do sangue do paciente. Isso é feito coletando sangue em um tubo contendo um anticoagulante que impede a coagulação do sangue.

No entanto, diferentes anticoagulantes podem afetar a composição e as propriedades do plasma de várias maneiras. Então, entre os vários anticoagulantes disponíveis (EDTA, ACD-A, citrato de sódio, etc.), qual é o melhor para produzir PRP?

No geral, as evidências da pesquisa sugerem que o ACD-A produz PRP com melhor concentração, ativação e morfologia de plaquetas em comparação com EDTA ou citrato de sódio [2]. Em contraste, as concentrações de fatores de crescimento não diferiram com o uso de EDTA, ACD-A ou citrato de sódio, embora as células-tronco mesenquimais proliferassem mais facilmente no PRP preparado com ACD-A ou citrato de sódio [3] .

Esses achados sugerem que o ACD-A é o anticoagulante de escolha para a preparação de plasma para PRP antes da centrifugação.

O melhor protocolo e taxas de centrifugação prp

Usando centrifugação diferencial, as plaquetas podem ser separadas e concentradas em relação a outros componentes do plasma. No entanto, para otimizar as concentrações de plaquetas e fatores de crescimento, mantendo a integridade e viabilidade das plaquetas, um protocolo de centrifugação apropriado deve ser usado.

Abaixo, resumimos as principais recomendações sobre como escolher a melhor centrífuga para o PRP, bem como a temperatura ideal, a força centrífuga e a duração e o protocolo de rotação para gerar o PRP.

A força centrífuga relativa é uma expressão da força-g; a força gravitacional da Terra. Ao calcular a força-g, tenha em mente que a força-g que atua em uma partícula está exponencialmente relacionada à velocidade de rotação. O índice é expresso em rotações por minuto (rpm). O expoente é especialmente importante quando se considera a velocidade centrífuga; por exemplo, dobrar a velocidade e quadruplicar a força.

As centrífugas comercialmente disponíveis são projetadas para maximizar a granulação e separação de plaquetas quando usadas com seus respectivos kits de PRP. Os kits de PRP disponíveis comercialmente variam em peso e tamanho, portanto, cada kit requer uma centrífuga diferente. Os fabricantes estabelecem protocolos para otimizar o processo de precipitação com base no tamanho exato do kit.

Seleção de Modelos de Centrífuga

Que fatores devem ser considerados ao selecionar um modelo de centrifugação para concentrar plaquetas e fatores de crescimento no PRP?

Em geral, as centrífugas oscilantes (horizontais) são a melhor escolha para a preparação do PRP porque permitem uma melhor separação dos componentes do plasma com base em sua densidade [4]. Além disso, reduzem o grau de trauma e dano celular e melhoram a qualidade do PRP em comparação com a centrífuga angular.

Centrífugas recomendadas comumente usadas para preparar PRP:

Deve-se tomar cuidado para selecionar a centrífuga correta para o tipo de tubo de coleta usado, especialmente ao usar um kit comercial de preparação de PRP. Neste caso, a centrífuga apropriada deve ser selecionada de acordo com as instruções do fabricante.

Existem três kits de PRP disponíveis para os laboratórios obterem concentrados de plaquetas:

1. Sistema de separação de gel

Os sistemas separadores de gel usam osmose para garantir que os concentrados de plaquetas sejam capturados em uma camada de gel separada dos glóbulos brancos e vermelhos. Este sistema de centrifugação terá contagens de plaquetas mais baixas do que outros sistemas, mas também é uma das maneiras mais eficientes de acabar com plasma com uma contagem de glóbulos brancos mais baixa.

2. Sistema Buffy Coat

Os glóbulos brancos e as plaquetas são capturados em uma camada acima da camada de glóbulos vermelhos isolados na amostra final usando um kit de buffy coat. Esta centrifugação torna mais fácil para os laboratórios obter amostras com altas contagens de plaquetas, embora a buffy coat também retenha os glóbulos brancos para uma contagem considerável de glóbulos brancos.

3. Sistema de Dupla Torção Buffy Coat

Aumentar a taxa de centrifugação permite uma melhor filtração de outros tipos de células da amostra final, resultando em melhor recuperação de plaquetas e viabilidade plaquetária em amostras de PRP concentradas. A adição de spins duplos ao sistema de buffy coat permite que as amostras de PRP sejam feitas de plaquetas concentradas quase puras que permanecem na camada de plasma e podem ser facilmente removidas da camada de glóbulos vermelhos agregada abaixo.

Embora as centrífugas de laboratório possam replicar tecnicamente a mesma força centrífuga necessária para separar células-tronco, células sanguíneas e outros tipos de células dos concentrados de plaquetas, apenas os kits de PRP corretos têm a força centrífuga necessária para preparar adequadamente o PRP. As tentativas de usar uma centrífuga de laboratório só produzirão plasma pobre em plaquetas – que ainda pode ser usado para terapia plaquetária autóloga, mas menos eficaz.

Centrifugação e temperatura

Os fatores mais importantes a serem considerados na centrifugação são tempo , velocidade e temperatura, mas nenhuma das centrífugas de PRP comercialmente disponíveis parece ser capaz de controlar a temperatura. Essa supervisão da indústria poderia levar a resultados diferentes para os biológicos ósseos?

As plaquetas podem ser ativadas prematuramente se a amostra for aquecida durante a centrifugação. Além disso, o calor pode danificar as plaquetas e reduzir a viabilidade. As centrífugas de resfriamento retardam os processos biológicos. E ajuda a manter a vitalidade das plaquetas. Este fenômeno biológico bem conhecido foi reconhecido pelos pesquisadores. Uma vez que está associado a uma maior ativação plaquetária e liberação de grânulos alfa¹. No entanto, a viabilidade das plaquetas raramente é danificada durante a centrifugação.

Mais pesquisas são necessárias para entender melhor o papel da temperatura na preparação do PRP. A reprodução de resultados ao usar materiais biológicos depende do controle preciso das variáveis. Os resultados conflitantes no campo da biologia ortopédica podem estar relacionados a diferentes temperaturas das amostras. O protocolo ideal de centrifugação e centrifugação de PRP depende das especificações exatas do kit de PRP. A taxa de excentricidade ideal e a duração são calculadas com base na massa e tamanho do kit PRP. Pesquisadores e médicos se beneficiarão de experimentos projetados para avaliar os aumentos de temperatura associados à viabilidade das plaquetas durante a centrifugação.

Condições de armazenamento para PRP

No que diz respeito às melhores práticas de armazenamento do PRP, há evidências de que o armazenamento à temperatura ambiente é suficiente – no entanto, deve-se tomar cuidado se as amostras forem armazenadas por mais de algumas horas.

Idealmente, o PRP deve ser usado dentro de 8 horas após a centrifugação. Porque isso mantém a concentração de leucócitos e o pH da solução.

No entanto, o PRP pode ser armazenado com segurança à temperatura ambiente por 24 horas sem afetar a contagem ou ativação de plaquetas. Portanto, tempos de armazenamento mais longos são possíveis se as plaquetas forem um ingrediente-chave necessário para o tratamento clínico.

Conclusão

Embora o PRP seja amplamente utilizado terapeuticamente para ajudar no reparo tecidual e no crescimento ósseo. Mas saber a melhor maneira de fazer isso nem sempre é óbvio, dada a multiplicidade de maneiras possíveis. Com as evidências e recomendações deste artigo, esperamos que a preparação do PRP em sua própria clínica ou laboratório possa ser otimizada para melhorar a qualidade do atendimento aos seus pacientes.